Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Определение глюкозы в яичном белке >>>

  Ответов в этой теме: 5

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Определение глюкозы в яичном белке
Глюкальщик
Пользователь
Ранг: 4

10.11.2010 // 18:55:37     
Подскажите, пожалуйста, прибор или метод определения глюкозы в яичном белке - что-нибудь простое, типа обычного глюкометра для диабетиков, но лучше без расходуемых материалов
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
-Михаил-
Пользователь
Ранг: 119


10.11.2010 // 23:02:16     
Боюсь, без расходных материалов понадобится поляриметр-сахариметр. Не факт, что удастся определить низкие концентрации. Можно фотометрически с орто-толуидиновым реактивом (раньше существовал такой набор для определения глюкозы в сыворотке крови). Метод подразумевает депротеинирование субстрата раствором трихлоруксусной кислоты с последующим инкубированием супернатанта на кипящей водяной бане и фотометрию на ФЭКе. Можно проэкспериментировать с набором реактивов для ферментативного определения глюкозы в той же сыворотке (например, фирмы ИМПАКТ, "ФОТОГЛЮКОЗА"). Там депротеинирование не используется, так как ТХУ осадит и фермент. А избавиться от депротеинирующего реагента вряд-ли удастся. Крайний случай - ВЭЖХ. Чтобы не убить колонку овоальбумином, придётся, видимо, высвобождать глюкозу из яичной массы диализом. Я бы взял набор "ФОТОГЛЮКОЗА", он стоит около 500 р, для 150 определений по паспорту (можно растянуть на 400, если на ФЭКе использовать микрокюветы, или даже больше), растворил бы его, как рекомендовано в инструкции (в колбу таблетку буфера, хромогена, перемешать хорошенько в воде). Точную навеску белка аккуратно, без пены, смешал бы с определённым объёмом воды (например, 0,200 г белка и до 5,00 мл Н2О), и, использовал бы 0,05-0,1 мл полученной смеси для 1 или 2 мл глюкозидазного реагента. Насколько помню, длина волны 500 нм, но, диапазон от 490 до 550 подойдёт вполне. В набор входит и калибратор глюкозы - 10 мМоль/л. Недавно встречал в Инете подобный набор фирмы АГАТ, кажется. После всего надо не забыть сделать правильный перерасчёт, учитывая все разведения, навески и т.д.
Попробуйте, сообщите, что из этого вышло. Был бы очень признателен.
P.S. Думаю, ожидаемая концентрация глюкозы будет в пределах 100-200 мг в 100 г. белка. Могу и ошибаться. Самому любопытно ))
-Михаил-
Пользователь
Ранг: 119


10.11.2010 // 23:24:09     
Предполагаю, что тест-полоски на глюкозу не помогут, как и приборы для диабетиков. Яичный белок отличается от крови вязкостью и, подозреваю, другими свойствами. Это вряд-ли хорошо скажется на точности определения. Можно попробовать пойти по пути разбавления его в дистиллированной воде или физрастворе (0,89% NaCl) и, тогда, наносить полученный раствор на полоску или вводить его в глюкометр. В любом случае, погрешность будет большой. Особенно, при низких ожидаемых концентрациях.
kot
Пользователь
Ранг: 1812


11.11.2010 // 7:14:06     

-Михаил- пишет:
Предполагаю, что тест-полоски на глюкозу не помогут, как и приборы для диабетиков. Яичный белок отличается от крови вязкостью и, подозреваю, другими свойствами. Это вряд-ли хорошо скажется на точности определения. Можно попробовать пойти по пути разбавления его в дистиллированной воде или физрастворе (0,89% NaCl) и, тогда, наносить полученный раствор на полоску или вводить его в глюкометр. В любом случае, погрешность будет большой. Особенно, при низких ожидаемых концентрациях.
Ферментативный метод кроме тест полосок существует и в "чистом" виде, наборы правда дорогие довольно, и методику придется отрабатывать, но точность ИМХО повысится. А белок можно "осадить" в этом особых проблем не вижу.
-Михаил-
Пользователь
Ранг: 119


12.11.2010 // 19:49:18     
Осаждение белка для ферментативного метода непригодно, так как фермент в ферментативной реакции - тоже белок. Избавиться от осадителя полностью не удастся.
kot
Пользователь
Ранг: 1812


15.11.2010 // 7:35:15     

-Михаил- пишет:
Осаждение белка для ферментативного метода непригодно, так как фермент в ферментативной реакции - тоже белок. Избавиться от осадителя полностью не удастся.
1. А мы то лохи осаждаем, наверное ГОСТ неправильный, спасибо Вам за сигнал, будем разбираться.
2. А вообще-то "осаждать" - не значит обязательно добавлять осадитель. Можно центрифугировать например или через колоночку пропустить. Правда для яйца я таких экспериментов не проводил, так что это так предположения.

  Ответов в этой теме: 5

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты