Российский химико-аналитический портал | химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
|
ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
Варианты по методике ВЭЖХ >>>
|
Автор | Тема: Варианты по методике ВЭЖХ | ||
MeOH Пользователь Ранг: 487 |
26.10.2010 // 21:32:48
Редактировано 2 раз(а) Решил подробно описать насущные проблемы, хочется услышать критику в помощь. Возлюбилось работать с TFA(1.8pH) пришла новая Триарт 250*4.6 3мкм и задал ей контрольное разделение колистина, доксициклина и энрофлоксацина Т-33, Фаза A-ACN/0.1%TFA 2/98, B-ACN насос 1525 Градиент А-5мин-100%, к 30мин-20% 215нм .черным выходят полимиксины(мелкие) и триметоприм, синим энрофлоксацин, зеленым доксициклин, голубенькая-растворитель. Полимиксины накрыл энрофлоксацин. -колистин далее синий(254)-амоксициллин тригидрат, красный-доксициклин гиклат(360), зеленый-триметоприм с колистином(254), розовый-антрацен(254), черный-растворитель (254) Почему может быть такая кривая базовая? ПС:раньше с новыми колонками дела не имел. изменил градиент: Градиент А-5мин-98%, к 45мин-45% снизил pH до 1.6 215 черное-энрофлоксацин-колистин зеленое-триметоприм-колистин синяя-растворитель Расположение пиков поменялось!, левый пик попал на один из полимиксинов. триметоприм с колистином длины волн снизу-210,212,215,225,230, 254 254 Энрофлоксацин-черный Колистин триметоприм-зеленый Растворитель-синий Почему так резко сменилось расположение пиков? Почему столько примесей наделило? TFA не ВЭЖХ, а фор синтез-Мерка-играет роль? там тоже чистота выше 99. В чем причины волн?, пузырей точно нету. |
||
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
pivas Пользователь Ранг: 73 |
26.10.2010 // 21:55:41
по Y-шкале что у вас - милливольты? если да, то "плохая" ТФУ может еще и не такое наколбасить. мы от жадности и от бедности используем мерковскую ТФУ для синтеза, но у нас "меньше 500 mV - не пик", так что плевать на кривизну базовой линии... |
||
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
26.10.2010 // 23:40:44
Редактировано 1 раз(а) Навскидку две причины - грязная тфу и пузыри.. Я тфу не использую, только фосфорку, и проблем никакущих не имею, хоть и фосфорка х.ч., и, бывает, добавляю ее частенько до 0.5% .. Пузыри.. первая рекомендация - вместо программы от 0% до 20% использовать от 0% до 100%, а 2-ым растворителем сделать не чистый ацетонитрил, а 20%-ный. Оба растворителя тщательно продегазировать. На выход детектора поставить противодавление (собрать из фитинга, муфты и заглушки).. Ну и, судя по хроматограмме, лучше начинать не с 2%, а с чего-то побольше. Кучу места есть в начале и середине, а дальше все схлопывается. Быть может даже лучше все делать просто в изократе на 15%-17% ацетонитрила. Может быть, имеет смысл подогреть до 40-45, а то все-таки 25 см колонка с 3-х микронником.. после подогрева, глядишь, и скорость можно будет поднять |
||
MeOH Пользователь Ранг: 487 |
27.10.2010 // 0:05:47
О! Прошу прощения градиент не так нарисовал-исправил Концентрации всех веществ кроме антрацена - 1 мкг/мл, .антрацен-0,1, колистин нижний-10 ТФА-фор синтез-15 тр литр, фор хроматографи 100-жалко( хороша же - светится плохо. давал на ISP и MSMS - вроде не жалуются)). надо отдельно проверить. шкала: WATERS 2487 диапазон измерения 0,0001 - 4,000 AUFS мож кто с насосом этим дело имеет мож в смесителе дело? Конечно неплохо второй растворитель не чистый АСN делать, но экономии ради)).. методика-секретная разработка одного фарм предприятия-они её на производственном контроле используют, на гос. контроль же предоставляли изократику на сульфате с фосфоркойтоже делит но хуже, солей все боятся как огня. градусами побалуюсь, согласен, а вот больше АСN вначале если добавить то как раз полимиксины от других хуже отделяются делема. Да и в чем причина пики поменялись местами при смене пш всего на 0,2 еденицы? |
||
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
27.10.2010 // 0:11:38
Нестабильная система Знаете стишок - если в кране нет воды, значит.. и т.д. по тексту.. Данная методика уже не проходит валидационный тест на robustness и непригодна к использованию. Вот и весь сказ. Нестабильность, неустойчивое разлделение - это все семь бед один ответ. Данная система непригодна для определения. Как ее сделать пригодной - я не знаю поскольку эти названия лекарств для меня - китайская грамота, я понимаю только структурные формулы |
||
MeOH Пользователь Ранг: 487 |
27.10.2010 // 0:26:39
Редактировано 1 раз(а) разве робустность может предусматривать разброс по пш? +-0.1 это не критично а у нас 0,2))в любом случае, как понимаю, данная методика безнадежна( ок утром залью ссылки на вещества и фармакопейную статью на колистин |
||
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
27.10.2010 // 0:31:53
Редактировано 1 раз(а) Обязательно. Robustness влючает автоматически все параметры, которые оказывают влияние на разделение. Ну так +-0.1 и смотреть на селективность.. а какая уж тут на фиг селективность, когда порядки элюирования меняются Давайте организуем мафию - Вы запарывайте методы, отправляйте ко мне за откат, я их налаживаю - всем одна польза Кстати кроме шуток - я-таки работаю над "рекомендациями..", и такие случаи действительно помогают мне впомнить про косяки, которые могут случаться на практике.. так что, можно сказать, система обсуждения методик на форуме принесла какие-то маленькие (и горькие) плоды |
||
MeOH Пользователь Ранг: 487 |
27.10.2010 // 0:36:25
за откат поучился бы отлаживать, лишь бы официальную бумагу дали с надписьом вроде-"КМБ у КонстантинаС"- , остальное сам как нибудь |
||
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
27.10.2010 // 1:06:48
Редактировано 2 раз(а) Я дам, конечно, официальную бумагу.. называется в общем случае актом содержащем в качестве приложения отчет с картинками, условиями и валидацией по полной программе .. в принципе ведь - юр. лицо, имеющее право на разработку всяких технологий (забыл как это точно в кодах ОКПО формулируется), лицензирование на этот вид деятельности не требуется.. Алексей, я вот еще что подумал - все-таки не спешите методику "в морду" кидать, все-таки тфу откровенно грязная, могут предъявить что-то вроде "не получилось из-за грязных реагентов".. надо бы правильнее переснять все на чистой, либо приготовить водный раствор грязной тфу и пропустить его через активированный уголь, или просто через С18 картридж.. "На сульфате с фосфоркой" - это в смысле с ион-парным реагентом, т.е. додецилсульфатом и рН около 2 фосфоркой? На той же колонке? "Делит хуже" - это по сравнению с градиентом с "затянутым" началом? Нет, ну такое "затянутое начало" на 70% хроматограммы - это ж бардак... ручки чешутся похимичить тут интуиция подсказывает сразу несколько интересных ходов - от банального амидаС16 до более хитрых смешанных оф-ионообменных.. Узнать бы хоть формулы аналитов, а то "летим по приборам" |
||
MeOH Пользователь Ранг: 487 |
27.10.2010 // 11:45:42
Я о другом-нужны официальные курсы-корочка нужна, у всех есть у меня нет(, только охота пройти курсы там, где меня реально "добьют" по пробелам химизма процессов в первую очередь, те ищу реального спеца вроде вас. Методика: методика не разрабатывается под конкретные аналиты-с мин затратами хочется "ВСЕ!" делить, те по максимуму, колонку менять не буду, пока, конечно хочется помурыжить, по времени быстрее сделать, но пока надо решить вопросы с кислотой и волнами Тиамулин сульфат натрия-фармакопейная статья |
||
DSP007 VIP Member Ранг: 2228 |
27.10.2010 // 13:43:50
Редактировано 1 раз(а) Вот еще чего - у вас 215 , там не только ТФУ может колбасить, но и вода и ацетонитрил. По ацетонитрилу была тут год назад большая тема с проклятиями производителям. Если уж пошла такая пьянка- то рН в смесях ацетонитрил/вода нехило отличается от просто воды . Ваш триарт на такое рассчитан? |
|
||
|
ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
Размещение рекламы / Контакты |