Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Варианты по методике ВЭЖХ >>>

  Ответов в этой теме: 12
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Варианты по методике ВЭЖХ
MeOH
Пользователь
Ранг: 486

26.10.2010 // 21:32:48     
Редактировано 2 раз(а)

Решил подробно описать насущные проблемы, хочется услышать критику в помощь.
Возлюбилось работать с TFA(1.8pH) пришла новая Триарт 250*4.6 3мкм и задал ей контрольное разделение колистина, доксициклина и энрофлоксацина
Т-33, Фаза A-ACN/0.1%TFA 2/98, B-ACN
насос 1525
Градиент А-5мин-100%, к 30мин-20%

215нм .черным выходят полимиксины(мелкие) и триметоприм, синим энрофлоксацин, зеленым доксициклин, голубенькая-растворитель. Полимиксины накрыл энрофлоксацин.

-колистин
далее

синий(254)-амоксициллин тригидрат, красный-доксициклин гиклат(360), зеленый-триметоприм с колистином(254), розовый-антрацен(254), черный-растворитель (254)
Почему может быть такая кривая базовая? ПС:раньше с новыми колонками дела не имел.
изменил градиент: Градиент А-5мин-98%, к 45мин-45%
снизил pH до 1.6

215
черное-энрофлоксацин-колистин
зеленое-триметоприм-колистин
синяя-растворитель
Расположение пиков поменялось!, левый пик попал на один из полимиксинов.

триметоприм с колистином длины волн снизу-210,212,215,225,230, 254

254
Энрофлоксацин-черный
Колистин триметоприм-зеленый
Растворитель-синий
Почему так резко сменилось расположение пиков? Почему столько примесей наделило? TFA не ВЭЖХ, а фор синтез-Мерка-играет роль? там тоже чистота выше 99. В чем причины волн?, пузырей точно нету.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
pivas
Пользователь
Ранг: 73


26.10.2010 // 21:55:41     
по Y-шкале что у вас - милливольты? если да, то "плохая" ТФУ может еще и не такое наколбасить. мы от жадности и от бедности используем мерковскую ТФУ для синтеза, но у нас "меньше 500 mV - не пик", так что плевать на кривизну базовой линии...
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


26.10.2010 // 23:40:44     
Редактировано 1 раз(а)

Навскидку две причины - грязная тфу и пузыри..

Я тфу не использую, только фосфорку, и проблем никакущих не имею, хоть и фосфорка х.ч., и, бывает, добавляю ее частенько до 0.5% ..

Пузыри.. первая рекомендация - вместо программы от 0% до 20% использовать от 0% до 100%, а 2-ым растворителем сделать не чистый ацетонитрил, а 20%-ный. Оба растворителя тщательно продегазировать. На выход детектора поставить противодавление (собрать из фитинга, муфты и заглушки)..

Ну и, судя по хроматограмме, лучше начинать не с 2%, а с чего-то побольше. Кучу места есть в начале и середине, а дальше все схлопывается. Быть может даже лучше все делать просто в изократе на 15%-17% ацетонитрила. Может быть, имеет смысл подогреть до 40-45, а то все-таки 25 см колонка с 3-х микронником.. после подогрева, глядишь, и скорость можно будет поднять
MeOH
Пользователь
Ранг: 486


27.10.2010 // 0:05:47     
О! Прошу прощения градиент не так нарисовал-исправил
Концентрации всех веществ кроме антрацена - 1 мкг/мл, .антрацен-0,1, колистин нижний-10
ТФА-фор синтез-15 тр литр, фор хроматографи 100-жалко(
хороша же - светится плохо. давал на ISP и MSMS - вроде не жалуются)). надо отдельно проверить.
шкала: WATERS 2487 диапазон измерения 0,0001 - 4,000 AUFS
мож кто с насосом этим дело имеет мож в смесителе дело? Конечно неплохо второй растворитель не чистый АСN делать, но экономии ради))..
методика-секретная разработка одного фарм предприятия-они её на производственном контроле используют, на гос. контроль же предоставляли изократику на сульфате с фосфоркойтоже делит но хуже, солей все боятся как огня.
градусами побалуюсь, согласен, а вот больше АСN вначале если добавить то как раз полимиксины от других хуже отделяются делема.
Да и в чем причина пики поменялись местами при смене пш всего на 0,2 еденицы?
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


27.10.2010 // 0:11:38     
Нестабильная система Знаете стишок - если в кране нет воды, значит.. и т.д. по тексту.. Данная методика уже не проходит валидационный тест на robustness и непригодна к использованию. Вот и весь сказ.

Нестабильность, неустойчивое разлделение - это все семь бед один ответ. Данная система непригодна для определения. Как ее сделать пригодной - я не знаю поскольку эти названия лекарств для меня - китайская грамота, я понимаю только структурные формулы
MeOH
Пользователь
Ранг: 486


27.10.2010 // 0:26:39     
Редактировано 1 раз(а)

разве робустность может предусматривать разброс по пш? +-0.1 это не критично а у нас 0,2))в любом случае, как понимаю, данная методика безнадежна(
ок утром залью ссылки на вещества и фармакопейную статью на колистин
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
УВИ-спектрофотометр СФ-2000 УВИ-спектрофотометр СФ-2000
Спектрофотометр с диодной матрицей. Спектральный диапазон: 190-1100 нм.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


27.10.2010 // 0:31:53     
Редактировано 1 раз(а)

Обязательно. Robustness влючает автоматически все параметры, которые оказывают влияние на разделение.

Ну так +-0.1 и смотреть на селективность.. а какая уж тут на фиг селективность, когда порядки элюирования меняются

Давайте организуем мафию - Вы запарывайте методы, отправляйте ко мне за откат, я их налаживаю - всем одна польза

Кстати кроме шуток - я-таки работаю над "рекомендациями..", и такие случаи действительно помогают мне впомнить про косяки, которые могут случаться на практике.. так что, можно сказать, система обсуждения методик на форуме принесла какие-то маленькие (и горькие) плоды
MeOH
Пользователь
Ранг: 486


27.10.2010 // 0:36:25     

КонстантинС пишет:
Обязательно. Robustness влючает автоматически все параметры, которые оказывают влияние на разделение.

Ну так +-0.1 и смотреть на селективность.. а какая уж тут на фиг селективность, когда порядки элюирования меняются

Давайте организуем мафию - Вы запарывайте методы, отправляйте ко мне за откат, я их налаживаю - всем одна польза


за откат поучился бы отлаживать, лишь бы официальную бумагу дали с надписьом вроде-"КМБ у КонстантинаС"- , остальное сам как нибудь
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


27.10.2010 // 1:06:48     
Редактировано 2 раз(а)

Я дам, конечно, официальную бумагу.. называется в общем случае актом содержащем в качестве приложения отчет с картинками, условиями и валидацией по полной программе .. в принципе ведь - юр. лицо, имеющее право на разработку всяких технологий (забыл как это точно в кодах ОКПО формулируется), лицензирование на этот вид деятельности не требуется..

Алексей, я вот еще что подумал - все-таки не спешите методику "в морду" кидать, все-таки тфу откровенно грязная, могут предъявить что-то вроде "не получилось из-за грязных реагентов".. надо бы правильнее переснять все на чистой, либо приготовить водный раствор грязной тфу и пропустить его через активированный уголь, или просто через С18 картридж..

"На сульфате с фосфоркой" - это в смысле с ион-парным реагентом, т.е. додецилсульфатом и рН около 2 фосфоркой? На той же колонке? "Делит хуже" - это по сравнению с градиентом с "затянутым" началом?

Нет, ну такое "затянутое начало" на 70% хроматограммы - это ж бардак... ручки чешутся похимичить тут интуиция подсказывает сразу несколько интересных ходов - от банального амидаС16 до более хитрых смешанных оф-ионообменных..

Узнать бы хоть формулы аналитов, а то "летим по приборам"
MeOH
Пользователь
Ранг: 486


27.10.2010 // 11:45:42     

КонстантинС пишет:
Я дам, конечно, официальную бумагу.. называется в общем случае актом :
Я о другом-нужны официальные курсы-корочка нужна, у всех есть у меня нет(, только охота пройти курсы там, где меня реально "добьют" по пробелам химизма процессов в первую очередь, те ищу реального спеца вроде вас.
Методика:
pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/summary/summary.cgi?cid=44144393&loc=ec_rcs
pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/summary/summary.cgi?cid=71188&loc=ec_rcs
pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/summary/summary.cgi?cid=6420082&loc=ec_rcs
pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/summary/summary.cgi?cid=33613&loc=ec_rcs
методика не разрабатывается под конкретные аналиты-с мин затратами хочется "ВСЕ!" делить, те по максимуму, колонку менять не буду, пока, конечно хочется помурыжить, по времени быстрее сделать, но пока надо решить вопросы с кислотой и волнами
Тиамулин pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/summary/summary.cgi?cid=33613&loc=ec_rcs например в этой методике выходит на 4й минуте-бывают чудо комплексы препаратов-умудряются сразу по 11 дв в одну смесь напхать, самое интересное на каждое ДВ только ссылка на фармстатью))
сульфат натрия-фармакопейная статья
DSP007
VIP Member
Ранг: 2228


27.10.2010 // 13:43:50     
Редактировано 1 раз(а)

Вот еще чего - у вас 215 , там не только ТФУ может колбасить, но и вода и ацетонитрил. По ацетонитрилу была тут год назад большая тема с проклятиями производителям.
Если уж пошла такая пьянка- то рН в смесях ацетонитрил/вода нехило отличается от просто воды . Ваш триарт на такое рассчитан?

  Ответов в этой теме: 12
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты