Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

СФ определение РНК/ДНК, подскажите методику >>>

  Ответов в этой теме: 6

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: СФ определение РНК/ДНК, подскажите методику
Ромашка
Пользователь
Ранг: 4

 		14.05.2010 // 11:06:43     
Здравствуйте.
Передо мной стоит задача определить концентрацию нуклеиновых кислот в мышцах рыб для оценки показателя РНК/ДНК. Хотим начать со спектрофотометрии. Подскажите, пожалуйста, проверенную методику определения, начиная с процесса гомогенизации ткани.
ANCHEM.RU
 Администрация
Ранг: 246
Чайник
Пользователь
Ранг: 33
14.05.2010 // 18:52:10     
www.anchem.ru/forum/read.asp?id=2109&recordnum=0
Ромашка
Пользователь
Ранг: 4
15.05.2010 // 12:26:16     
Редактировано 3 раз(а)

Спасибо.
С этой ссылки и началось моё знакомство с этим сайтом.
Я не могу определится какая из этих методик лучше для решения моей конкретной задачи. И не во всех случаях понятно, как подготовить пробу (какая нужна навеска).
Скажите, пожалуйста, на чём Вы всё-таки остановились и порекомендуете мне?
Escie
Пользователь
Ранг: 41
19.05.2010 // 18:28:10     
Редактировано 3 раз(а)

Ромашка пишет:
Здравствуйте.
Передо мной стоит задача определить концентрацию нуклеиновых кислот в мышцах рыб для оценки показателя РНК/ДНК. Хотим начать со спектрофотометрии. Подскажите, пожалуйста, проверенную методику определения, начиная с процесса гомогенизации ткани.
Спеткрофотометрия и в данном случае (когда хотим начать), и в дальнейшем (когда уже начали и все работает) - оптимальный вариант. Как освоитесь, можете (а надо ли?) попробовать уже другие методы.

Вообще вам нужен Маниатис с соавторами. В основном при оформлении работ, когда говорят об определении концентрации ДНК/РНК, ссылаются на Маниатиса. Есть англоязычная и русскоязычная версии книги. Статьи естественно можно поискать

В русском издании 84 года стр. 410.

escie.epage.ru/maniatis_gennaya_ingeneriya.zip
Ромашка
Пользователь
Ранг: 4
21.05.2010 // 12:08:00     
Escie пишет:
Вообще вам нужен Маниатис с соавторами. В основном при оформлении работ, когда говорят об определении концентрации ДНК/РНК, ссылаются на Маниатиса.


Спасибо, escie.
Как я понимаю в Маниатисе прописано определение НК в препарате, необходимое для дальнейшей работы с НК (например, ПЦР).
Я в литературе в рамках своей задачи никогда не встречала ссылки на Маниатиса. Ведь мне нужно определить концентрацию НК в грамме ткани. То есть необходимо определение отношения НК (РНК/ДНК) и РНК/ г. ткани.
Escie
Пользователь
Ранг: 41
21.05.2010 // 20:59:35     
Редактировано 1 раз(а)

Ромашка пишет:
Escie пишет:
Вообще вам нужен Маниатис с соавторами. В основном при оформлении работ, когда говорят об определении концентрации ДНК/РНК, ссылаются на Маниатиса.

Спасибо, escie.
Как я понимаю в Маниатисе прописано определение НК в препарате, необходимое для дальнейшей работы с НК (например, ПЦР).
Я в литературе в рамках своей задачи никогда не встречала ссылки на Маниатиса. Ведь мне нужно определить концентрацию НК в грамме ткани. То есть необходимо определение отношения НК (РНК/ДНК) и РНК/ г. ткани.
Извлекайте ваш НК в раствор. Определяйте концентрацию в растворе. Пересчитывайте на концентрацию в ткани. Это вариант. Определение концентрации и наличия белковых примесей описано у Маниатиса, он у вас есть.

Есть еще вариант с флуоресцентными зондами (на самом деле, банально - синтетические красители, гетероароматика), по разному специфичными к ДНК и РНК, к примеру акридиновый оранжевый и прочие. Возможно препараты у вас даже есть. А есть возможность использования метода флуоресценции? Или у вас только спектрофотометр?

---

Да, и наиболее целесообразный ход: вопрос лучше перенсти на форум молбиола molbiol.ru/

На самом сайте, кстати, информации по этой теме много.

Успехов.
Каталог ANCHEM.RU
 Администрация
Ранг: 246
Анализатор жидкости ФЛЮОРАТ-02-3М Анализатор жидкости ФЛЮОРАТ-02-3М
Упрощенная модель фильтрового флуориметра, предназначенная для выполнения рутинных измерений объектов, для которых предварительно установлены спектральные характеристики фотолюминесценции.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
Ромашка
Пользователь
Ранг: 4
23.05.2010 // 16:42:52     
Escie пишет:
Извлекайте ваш НК в раствор. Определяйте концентрацию в растворе. Пересчитывайте на концентрацию в ткани. Это вариант. Определение концентрации и наличия белковых примесей описано у Маниатиса, он у вас есть.
---

Я хотела попробовать по Маниатису, но меня остановило отсутсвие примеров в литературе по этой методике (по крайней мере, при определении РНК/ДНК в мышцах рыб). Поэтому засомневалась в надёжности такого определения и испугалась возможной критики своих методов при публикации результатов. Хотя, мне этот метод кажется простым и логичным (в переводе на грамм ткани), так как давно работаю с выделением НК для ПЦР... и методики отработаны...

И ещё возникает вопрос можно ли в таких исследованиях пользоваться готовыми китами для выделения РНК и ДНК.

Escie, Вы говорили, что встречали ссылки на Маниатиса в литереатуре. Скажите в каких исследованиях (на рыбках?, мышках? и т.д.)? (попробую поискать).

Спасибо за ссылку на молбиол, там на форумах ещё ни разу не была.

  Ответов в этой теме: 6

Ответ на тему

ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»
Размещение рекламы / Контакты