Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Гель-фильтрация - понять результат >>>

  Ответов в этой теме: 7

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Гель-фильтрация - понять результат
indigoriya
Пользователь
Ранг: 2

01.04.2005 // 15:15:48     
Уважаемые коллеги, хотелось бы узнать ваше мнение. Для выделения белка массой 20 кДа использовала гель-фильтрацию на S-100. Сам по себе белок образует крайне стабильные мультимерные агрегаты. Гель-фильтрация ведется в учловиях, когда белок переходит преимущественно в мономерную и димерные формы. Но при этом, он выходит в первом пике. Хотя в смеси наносимой на колонку присутсвуют белки гораздо более высокой молекулярной массы. Не могу найти объяснения, почему белок выходит первым.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


16.02.2006 // 16:11:36     
Ну, какие у кого соображения будут?
Garry
VIP Member
Ранг: 1075


17.02.2006 // 9:43:51     
Очертите так сказать, все что Вы делаете, а то из общих фраз сложно сделать вразумительные выводы. Какой белок ? , из чего выделяете ?, что такое S-100 (Сефадекс, Сефакрил ...)?, условия хроматографирования, ПФ.
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


17.02.2006 // 12:41:22     
Идея в том, что она пытается делить белок, имеющий субъединицы в 20 кДа, осложняется у нее это дело тем, что субъединицы легко образуют четвертичную структуру, где их может быть объединено до 24 штук и более. Она пытается анализировать все это дело в условиях, когда с/единицы способны существовать по 1-2 в отдельности, т.е. практически в условиях глубокой денатурации (я тоже не понял- как она их денатурирует- как для электрофореза SDS-PAGE или в совершенно дурных концентрациях детергентов?).
Сефакрил- это не слишком жесткий гель для водной гель-хроматографии с рабочим диапазоном 1-100 кДа (это самый мелкопористый из них). Это значит, что уже при объединении 5 (а не то, что 24) с/е все вывалится в предел эксклюзии. Мож, она нам пояснит еще чего? Если белок денатурировал в SDS, то и одной с/ед хватит, чтоб уйти в "исключение".
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


20.02.2006 // 21:09:48     
Ну, гуры местные...У кого все же есть соображения? Тема злободневная...
Сергей Костиков
VIP Member
Ранг: 1811


20.02.2006 // 22:49:46     
Редактировано 1 раз(а)


Serga пишет:
Ну, гуры местные...У кого все же есть соображения? Тема злободневная...
Злободневная, грите? А что ж в аналитический журнал не заходите? Вопрос-то только в природе аналита (ну, и чуть-чуть в размерах).
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Микропробирки типа Эппендорф Микропробирки типа Эппендорф
Используются для микробиологических и биохимических исследований.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


21.02.2006 // 4:55:30     

Сергей Костиков:
Вопрос-то только в природе аналита (ну, и чуть-чуть в размерах).
Вот, в этом "чуть- чуть" все и заключается, вероятно? По идее, для гель-фильтрации природа аналита должна быть безразлична. Или это будет уже не гель-хроматография.
Фантом из той же оперы
Пользователь
Ранг: 6


23.02.2006 // 2:47:33     

indigoriya пишет:
Уважаемые коллеги, хотелось бы узнать ваше мнение. Для выделения белка массой 20 кДа использовала гель-фильтрацию на S-100. Сам по себе белок образует крайне стабильные мультимерные агрегаты. Гель-фильтрация ведется в учловиях, когда белок переходит преимущественно в мономерную и димерные формы. Но при этом, он выходит в первом пике. Хотя в смеси наносимой на колонку присутсвуют белки гораздо более высокой молекулярной массы. Не могу найти объяснения, почему белок выходит первым.

Ну значит не переходит. Давайте на стол условия. Чего у Вас там? Мочевина? Гуанидин? Какая концентрация оных гадостей? Какой рН? Рекомендую 0.5 М уксусятины и 8 М мочевины. У меня в таких условиях бета-агрегаты валились (просто в мочевине при том же рН - не валились).

  Ответов в этой теме: 7

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты