Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Определение сахаров и кислот на ГЖХ >>>

  Ответов в этой теме: 16
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Определение сахаров и кислот на ГЖХ
drynn
Пользователь
Ранг: 26

11.03.2010 // 19:36:12     
Здравствуйте, коллеги!

Возникла новая задача определения смеси кислот, предположительно C1-C5, максимум C6, с различными функциональными группами (-OH, -CHO, -COOH, -C=C-). Для установления механизмов реакций.
Есть прибор GC-MS. (сам я больше с ВЭЖХ сталкивался)
Подсказали колонку для этих целей с сорбентом FFAP.
Кто сталкивался с таким, подскажите:
-какой набор кислот можно посмотреть на данной колонке?
-можно ли там же смотреть сахара? (или проблема сахаров в нелетучести)

Какие еще есть хорошие методы для решения данной задачи?
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
virtu
VIP Member
Ранг: 2130


11.03.2010 // 21:03:07     
Редактировано 1 раз(а)

Дериватизация.DB-5ms.ГХ-МС (EI,Q)
В первом приближении... Далее необходимо уточнять вопрос.
OldBrave
VIP Member
Ранг: 1186


12.03.2010 // 2:45:37     
Редактировано 1 раз(а)

-какой набор кислот можно посмотреть на данной колонке?
-можно ли там же смотреть сахара? (или проблема сахаров в нелетучести)


Одновременно определять ГЖХ кислоты цикла Крепса и углеводы не удается. Чтобы повысить летучесть углеводы нужно исчерпывающе метилировать, или ацетилировать, или силилировать. В любом случае - это использование короткой колонки при 300-350С. При этом нужно определиться какие углеводы нужно определить, - не все производные можно при этих условиях разделить.
Что касается определения ГЖХ оксикислот, то здесь однозначно анализ через исчерпывающее метилирование или силилирование.
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


12.03.2010 // 10:46:35     
Редактировано 2 раз(а)

И не сорбент, а нанесенная фаза..

На FFAP или WAX делают свободные кислоты - гомологи муравьиной; там еще могут быть CHO и C=C , но никак не ОН и СOOH. Последние - тольк с дериватизацией.

Дериватизованные производные можно, в принципе, на чем угодно. Но традиционно ацетилированные сахара, например, делают на колонке с 70% цианопропила типа BPX70.

Мне кажется, что при отсутствии ВЭЖХ-МС (это как раз для него задача!), лучше использовать ГХ (ПИД, МС) и ВЭЖХ (УФ) одновременно минус на минус авось даст плюс.

"Авось" - потому что речь-то не о методике, а об исследовании, причем не слабом..
Дмитрий (anchem.ru)
Администратор
Модератор форума
Ранг: 4367


12.03.2010 // 12:12:08     
Редактировано 3 раз(а)

Если речь про анализ неизвестных производных кислот, учитываейте что можеет получить непредсказуемый результат на неопробированных соединениях. Хотя условие до 6 атомов сужает границы поиска.

FFAP - правильный выбор при прямой работе с аналитами (без дериватизации). Что-то увидите но многое и не выйдет, как правильно было указано выше.
Почитайте про метод ввода on-column. Задумайтесь о возможных артефактах (появлении на хроматограмме пиков, которых не было в исходной смеси, например от терморазложение, допреакций при вводе). Задумайтесь об ожидаемых концентрациях и разбавлении до 10-8 г на компонент во вводе.

В общем настоятельно рекомендую ознакомиться прежде с литературой по ГХ и ГХ/МС прежде чем приступать к такой нетривиальной задаче.

Также рекомендую выполнить хотя бы минимальный поиск литературы по определению на ГХ и ГХ/МС ожидаемых кислотных классов. Благо сейчас это сделать не проблема, и статей после 96 года вполне будет достаточно. И сразу станет понятно и про методы дериватизации и про возможности.

virtu
VIP Member
Ранг: 2130


12.03.2010 // 13:08:11     

КонстантинС пишет:


На FFAP или WAX делают свободные кислоты - гомологи муравьиной; там еще могут быть CHO и C=C , но никак не ОН и СOOH. Последние - тольк с дериватизацией.

Мне кажется, что при отсутствии ВЭЖХ-МС (это как раз для него задача!), лучше использовать ГХ (ПИД, МС) и ВЭЖХ (УФ) одновременно минус на минус авось даст плюс.


На WAX c идеальными элюентами не делают (попробуйте, тогда поймете почему), и почему никак не -ОН (молочная кислота, например). И чем здесь поможет ВЭЖХ-УФ, без стандартов? Насчет ВЭЖХ-МС - многое зависит от МС, плюс "гидрофильная" хроматография или что-то в этом духе, хотя это можно "обойти" дериватизацией, в общем, целая история... не факт, что со счастливым концом.

to drynn: "Gas Chromatography and Mass Spectrometry A Practical Guide" Kitson F.G., Larsen B.S. - добавьте в список искомой литературы.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Динамический механический анализатор TA Instruments RSA-G2 Динамический механический анализатор TA Instruments RSA-G2
Исследовательский прибор, способный совмещать с динамическими измерениями УФ облучение или диэлектрический анализ в различных режимах (сжатие, растяжение, изгиб по двум и трем точкам, пенетрация, сдвиг, растяжение или сжатие с погружением в жидкость) и с варьированием газовых сред, температур и режимов нагружения.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
drynn
Пользователь
Ранг: 26


12.03.2010 // 13:43:49     
Редактировано 1 раз(а)

Всем спасибо за ответы. По теме:

Определение сахаров, это скорее "факультативная" задачи.
А первоочередная - это определение неизвестных кислот в водной смеси (где-то до C6) БЕЗ ДЕРИВАТИЗАЦИИ. Под дериватизацию "тупо" нет рук ((
Как это сделать оптимальнее с помощью ГХ-МС ?

Но -OH и даже -COOH там могут быть с очень большой вероятностью

Еще есть ВЭЖХ, но не ВЖЭХ-МС (((
drynn
Пользователь
Ранг: 26


12.03.2010 // 14:19:59     
Вот например так. В моем случае пройдет?
Или не факт, что все кислоты прометилируются?

Я ожидаю 1,2,максимум 3-х основные кислоты от С1 до С6.
Дополнительно с разными функциональными группами.

Для увеличения концентрации кислот в смеси супернатант упаривали досуха под вакуумом на роторном
испарителе при температуре 40-45°С. Из предварительных исследований известно, что в исследуемой
культуральной жидкости содержатся как летучие, так и нелетучие кислоты, поэтому перед концентрированием
исследуемую жидкость необходимо подщелочить 0,1 н NaОН до рН 9,2 для перевода кислот в соли.
Так как методом ГЖХ можно определить только летучие соединения, то задачей является перевод солей
органических кислот в летучие метиловые эфиры этих кислот. Осадок растворяли в бидистиллированной воде,
метилирование проводили избытком метанола в присутствии серной кислоты в течение 30 мин при 60°С.
Экстракцию эфиров осуществляли хлороформом.
Газожидкостную хроматографию проводили при следующих условиях. Использовали газовый
хроматограф Hewlett Packard 4890 D с пламенно-ионизационным детектором. Применяли кварцевую колонку
HP/NNOWAX длиной 30 м и внутренним диаметром 0,32 мм. В качестве неподвижная фазы использовали
модифицированный полиэтиленгликоль (толщина 0,5 мкм), в качестве газа-носителя – гелий, скорость потока
которого равна 21 см3/с. Температура испарителя – 250°С, температура детектора – 250°С. Анализ проводился в
режиме температурного градиента от 50 до 200°С.
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


12.03.2010 // 17:06:58     

drynn пишет:
гелий, скорость потока которого равна 21 см3/с.
Чего?
Самое распространенное заблуждение, когда считают, что чем мельче молекула, тем ее легче "найти и посчитать". Без дериватизации всякие низкоММ окси- и кетокислоты банально декарбоксилируют или отщепляют воду.
Korvet
Пользователь
Ранг: 1107


12.03.2010 // 17:41:33     
Да, так получается, но лучше все же HCl в метаноле, с серной может быть осмоление, у вас же матрица сложная поди. но помните что гидроксигруппы не прометилируются. ещё можно использовать диазометан, но также не включая ОН группы. без дериватизации не получится в любом случае.
OldBrave
VIP Member
Ранг: 1186


12.03.2010 // 21:23:45     
Редактировано 3 раз(а)

Лучше, конечно, обойтись без дериватизации, советую посмотреть:
www.phenomenex.com/WorkArea/showcontent.aspx?id=2321
www.phenomenex.com/products/brands/view.aspx?id=170&ekmensel=10_submenu_75_link_20
www.phenomenex.com/WorkArea/showcontent.aspx?id=2317
www.phenomenex.com/WorkArea/showcontent.aspx?id=2319
Для кислот (оксикислот) и большинства простых углеводов времена выхода для стандартных условий известны.
Полимеры и высшие углеводы осадить 60-70% EtOH, упариванием на роторе можно сконцентрировать в 20-100 раз до содержания >0,1 мг/мл и делить.
Для дериватизации советую посмотреть:
Fluorescent Labels for the Analysis of Mono- and Oligosaccharides N. V. Shilova and N. V. Bovin (e-mail: bovin{coбaчkа}carb.siobc.ras.ru) Russian Journal of Bioorganic Chemistry, Vol. 29, No. 4, 2003, pp. 309–324.

  Ответов в этой теме: 16
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты