Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Отмывка обращенно-фазной хроматографической колонки С18 >>>

  Ответов в этой теме: 4

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Отмывка обращенно-фазной хроматографической колонки С18
Dionisii
Пользователь
Ранг: 375

28.01.2010 // 10:14:05     
Братцы-химики, подскажите, пожалуйста, какой-нибудь приличный метод отмывки колонки после "биологии". Насколько мне известно - метод включает в себя ряд промывок растворами разной элюирующей силы. Причем, как мне известно, промывать надо перевернув колонку задом-наперед. Это все, что я знаю. Мне бы хотелось знать: 1)продолжительность промывок каждым элюентом, 2)их последовательность. Кстати, про "задом-наперед" это и сейчас актуально, или это архаика?
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
DSP007
VIP Member
Ранг: 2228


28.01.2010 // 10:34:44     
Если биология в основном жиры с липидами - меон->i-пропанол ( снизить расход, бо вязкий) -( изопропанол +метиленхлорид)- изопропанол-меон- фаза хранения.

Если биология - низкомолекулярные белки / протеины/глобулины - водой до опупения при температуре не ниже 30 и не выше 50 С.

Если биология высокомолекулярные белки то увы. Впрочем они либо проскакивают колонку насквозь без задержки , либо абсорбируются на фильтре и первых мм фазы колонки.

На будущее - приучитесь избавляться от вм белков в пробе , благо способов немерено - от банальной вредной ТХУ до замудренной переэкстракцией через органику. Обычным же методом для низкомолекулярных ( М<1000) является сорбция пробы на твердофазных патронах, которые осеновная масса белков проскакивает по эксклюзионному принципу.
Dionisii
Пользователь
Ранг: 375


28.01.2010 // 11:09:29     
Спасибо, отмываем первое, белков нет. А продолжительность отмывки каждым элюентом?, а как насчет "задом-наперед"?
DSP007
VIP Member
Ранг: 2228


28.01.2010 // 11:19:41     
Задом наперед всяко лучше.
Переходные- 2-3 объема колонки , промывочный- 20-30 объемов.

Метиленхлорид моет сильно, но имеет плохой нюанс- микропримеси соляной кислоты, срок службы колонки сокращается. Можно заменять гексаном, но он моет значительно хуже .
Изопропанол или любой другой высший спирт - имеет высокую вязкость. Оптимально мыть при температуре как можно выше- во первых при высокой температуре любые жиры расплавляются и легко растворяются в изопропаноле , во вторых у изопропанола вязкость ( а зачит и давление ) падает на треть на каждые 10С+.
При 60-70 С можно качать по нескольку милилитров в минуту, а при 20 С уже на 0,5 мл давление зашкаливает.
Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777


28.01.2010 // 13:06:17     
Редактировано 1 раз(а)

От липидов поприобуйте метил-третбутиловый эфир (MTBE). Он не вязкий, большинство липидов растворет замечательно и к тому же неполярный, т.е. с обратной фазы хорошо снимает даже триацилглицериды. Переходите из водных элюентов через метанол или ацетонитрил, без разницы.

Извините за опечатки, какие то непонятки с кодировкой. Потом исправлю когда смогу редактировать текст

  Ответов в этой теме: 4

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты