Форумы ANCHEM.RU: Methylene blue

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Methylene blue >>>

  Ответов в этой теме: 30
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Methylene blue

Puzir
Пользователь
Ранг: 45

17.03.2005 // 22:25:01

Редактировано 1 раз(а)

ПРОБЛЕМА- очень (почти необратимoe) сильное удерживание метиленого голубого. Условия: 15 cm * 3mm C18; подвиж. фаза - 75% MeOH, ацетатный буфер- 5 mM pH 5.
Добавление ион парного реагента (NaClO4 or sodium octanesulphonate) ничего не меняет.
Буду всем благодорен за советы.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Леонид
VIP Member
Ранг: 5266

18.03.2005 // 9:55:32

На неэндкепированной колонке этот краситель довольно прочно цепляется на немодифицированные участки силикагеля. В этом случае есть смысл взять более качественную колонку или динамическим модифицированием закрыть активные участки сорбента, добавив в элюент, например, соль цетилтриметиламмония. Причем нужно добавлять достаточно много (больше ККМ для данного состава элюента и рН), чтобы попасть в мицеллярный режим. В нем и концентрацию ацетонитрила можно снизить раза в 3-4.
Посоветовать что то более конкретное сложно, поскольку исходной информации маловато.

Puzir
Пользователь
Ранг: 45

18.03.2005 // 10:18:20

Понял. Спасибо.

Puzir
Пользователь
Ранг: 45

18.03.2005 // 13:20:16

Леонид пишет:
На неэндкепированной колонке этот краситель довольно прочно цепляется на немодифицированные участки силикагеля. В этом случае есть смысл взять более качественную колонку или динамическим модифицированием закрыть активные участки сорбента, добавив в элюент, например, соль цетилтриметиламмония. Причем нужно добавлять достаточно много (больше ККМ для данного состава элюента и рН), чтобы попасть в мицеллярный режим. В нем и концентрацию ацетонитрила можно снизить раза в 3-4.
Посоветовать что то более конкретное сложно, поскольку исходной информации маловато.

Что суть в остаточных силанольных групах - это 100 проц. К СОЖАЛЕНИЮ добавка 20 mM tetradecyltrimethylammonium bromide ничего неиэменила - краситель не элюируется. Колонок с endcaped C18 не имею. Но есть амино и нитрил фазы. Может у кого есть какие предложения etc.

Леонид
VIP Member
Ранг: 5266

18.03.2005 // 14:10:20

Редактировано 1 раз(а)

Можно попробовать добавить в элюент с 1% триметиламина и поиграться с рН, регулируя его фосфорной кислотой от 3 до 6,5.
А увеличить содержание катионогенного ПАВ до 0,1 М не пробовали?
Лучше сделать эксперимент на ТСХ, чтобы не гробить колонку. Подобрать элюент на водной основе, чтобы не раплывалось пятно красителя, а потом пробовать на колонке. Только, боюсь, более-менее приемлемые результаты будут в щелочной области, в которой на колонке работать не рекомендуется.

Puzir
Пользователь
Ранг: 45

18.03.2005 // 15:04:02

Редактировано 2 раз(а)

Леонид пишет:
Можно попробовать добавить в элюент с 1% триметиламина и поиграться с рН, регулируя его фосфорной кислотой от 3 до 6,5.
А увеличить содержание катионогенного ПАВ до 0,1 М не пробовали?
Думаю, что 20 mM ПАВа достаточно для превышения CMC в элюенте с 40 проц. метанола. Хотя чем черт не шутит - попробую увеличить.

ИЗМЕНЯТЬ pH, боюсь непоможет - этот краситель катион достаточно силного основания.
СПАСИБО.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Центральная аналитическая лаборатория ЗАО «База №1 Химреактивов»
Лаборатория аттестована ФГУ «Менделеевский центр стандартизации, метрологии и сертификации». Область аттестации включает химические реактивы и техническую продукцию.

Islander
VIP Member
Ранг: 1065

18.03.2005 // 21:40:06

Редактировано 1 раз(а)

Puzir пишет:
Колонок с endcaped C18 не имею. Но есть амино и нитрил фазы. Может у кого есть какие предложения etc.

Предлагаю взять нитрильную колонку, подвижную фазу ацетонитрил (80-95%) вода (5-15%) трифторуксусная кислота (0.01%-0.1%). Если удерживание слишком сильное, увеличьте содержание воды и/или ТФУК в подвижной фазе или добавьте 5-10% метанола. Для формы пика может также помочь добавка формата аммония, 1-2 мМ, не больше. То же самое можно сделать и на Вашей С18, большой разницы быть не должно. Закалывать 10-20 мкл, не более, в ацетонитриле либо подвижной фазе (если не микроколонка!).

Puzir
Пользователь
Ранг: 45

19.03.2005 // 11:35:39

Islander пишет:
Предлагаю взять нитрильную колонку, подвижную фазу ацетонитрил (80-95%) вода (5-15%) трифторуксусная кислота (0.01%-0.1%). Если удерживание слишком сильное, увеличьте содержание воды и/или ТФУК в подвижной фазе или добавьте 5-10% метанола. Для формы пика может также помочь добавка формата аммония, 1-2 мМ, не больше. То же самое можно сделать и на Вашей С18, большой разницы быть не должно. Закалывать 10-20 мкл, не более, в ацетонитриле либо подвижной фазе (если не микроколонка!).

___________________________________________________

А в чем суть ТФУК? Подавление диссоциации силанольных груп? Странно то, что на этой (C18)колонке мой предшественник без проблем определял катионный комплекс Fe(II) c 1,10-phenanthroline. Добавка 50-100 mM NaClO4 к стандартной подвижной фазе (CH3CN-H2O, acetate buffer, pH 5) позволила значительно ослабить удерживание и улучшить форму пика. ВЕДЬ methylene blue довольно схожий с вышеупомянутом комплексом.

Islander
VIP Member
Ранг: 1065

19.03.2005 // 14:52:52

Редактировано 1 раз(а)

Puzir пишет:

А в чем суть ТФУК? Подавление диссоциации силанольных груп?
С одной стороны, это, а с другой стороны, образование нейтральных и малополярных ионных пар в растворе. Таким образом, удерживание будет происходить за счет взаимодействий с полярными группами неподвижной фазы (силанолы, СN и адсорбированная в порах вода). Чем больше ТФУК, воды или соли (осторожно, растворимость соли при таком содержании ацетонитрила очень мала) в подвижной фазе, тем меньше удерживание. Проверено неоднократно на многих аминах и некоторых четвертичных аммониевых основаниях, чаще всего мы это делаем на немодифицированном силикагеле, но CN и неэндкепированный С18 тоже должны работать. Обращенно-фазовым механизмом здесь и не пахнет, форма пиков намного лучше.

Puzir
Пользователь
Ранг: 45

19.03.2005 // 16:38:09

А ВМЕСТО ТФУК есть какие либо алтернативы? HClO4?
H3PO4?

Islander
VIP Member
Ранг: 1065

19.03.2005 // 18:01:45

Puzir пишет:
А ВМЕСТО ТФУК есть какие либо алтернативы? HClO4?
H3PO4?

В данном случае, почти нет. Пентафторпропионовая или гептафтормасляная должны, по идее, тоже сработать. Упомянутые Вами кислоты нейтральных ионных пар с аминами в ацетонитрильных растворах, если не ошибаюсь, не образуют, поэтому вряд-ли подойдут. Алкилсульфокислоты я не пробовал, мой детектор не позволяет. С каким-то амином я пробовал играть с моно-, ди- и трихлоруксусными кислотами, можете попробовать последнюю, хотя эффект менее выражен по сравнению с ТФУК. Работал я также с относительно высокими концентрациями (1-5%) муравьиной кислоты, там механизм другой, ионообменный (на адсорбированной муравьиной кислоте), с увеличением концентрации к-ты удерживание растет, добавление воды или метанола приводит к уменьшению удерживания. Можете попробовать и этот вариант, начните с 1% муравьиной кислоты, 20% метанола и 10% воды в ацетонитриле. Общее правило в этих системах - чем меньше воды и метанола, тем сильнее удерживание.


Ответов в этой теме: 30 Страница: 1 2 3 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты