| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
LC-MS стеролов >>>
|
 |
| Автор | Тема: LC-MS стеролов | ||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
 20.09.2009 // 2:09:01
Редактировано 1 раз(а) Коллеги, подскажите пожалуйста хорошие обзоры или статьи общего характера по определению эндогенных стеролов методом LC-MS (/MS?). Судя по всему, нам придется это налаживать у себя. Литературы море и способы анализа встречаются самые экзотические. поэтому хотелось бы прочитать один -два хороших обзора / статьи чтобы приблизительно понять как это люди делают. Намеренно не указываю организм где мерить будем, так как он довольно экзотический и вряд ли что то будет работать в лоб. Поэтому интересует общая методология в разных организмах и средах чтобы было хотя бы понятно с чего начинать. Спасибо! |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
21.09.2009 // 1:43:37
Надо глянуть на работе, может, что-то есть. По эстрогенам точно есть, но Вас интересуют неароматические стеролы, не так ли? И какие пределы обнаружения нужны? |
||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
21.09.2009 // 8:54:23
Редактировано 1 раз(а) Спасибо! Совершенно справедливо, ароматических стеролов там 99% не будет (или уж сразу Нобелевка светит), идеально если бы сработало на уровне 50-100 fmol - условно, порядок вниз от холестерола, которого в этих животинах мало (они ауксотрофы по холестеролу). Будем эктрагировать из microdissected tissue, так что концентрация как таковая не принципиальна, а скорее общее количество материала. Принципиальнейший вопрос на сегодня - есть ли жизнь без APPI / APCI, и если да - с какой дериватизацией (что по определению не есть хорошо с самого начала) |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
21.09.2009 // 9:52:28
ESI такое не возьмет, ИМХО. Если только не присобачить к нему чего-то заряженного. |
||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
21.09.2009 // 18:04:08
Однозначно. Обзора не нашел, попробую сделать сам не претендующий на полноту микро-обзор на основе лит-ры и собственного опыта. APPI взять может: M. Varga,... J. Chrom. A, 1103, 278-283 (2006) На APCI для таких концентраций никакой надежды. ESI только с дериватизацией. По дериватизации в МС детектировании есть неполохой обзор: Zaikin V.G.,... Eur. J. Mass Spectrom., 12(2), 79-115 (2006) Наиболее перспективным может оказаться использование fluoro-1-methylpyridinium-p-toluenesulfonate (FMPT), этот реактив дает простой эфир с заряженной метилпиридиниевой группой: Bunzo Kashiwagi,... J. Andrology, 26(5), 586-591 (2005) J.M.E. Quirke,...J. Mass Spectrom., 36(12), 1294-1300 (2001) Но не знаю, насколько он пригоден для молекул, содержащих два и более гидроксила. Мои оптимизированные условия дериватизации таковы: растворить выпаренный экстракт в 50 мкл 50 мг/мл DMAP в дихлорометане, добавить 150 мкл 20 мг/мл FMPT в ацетонитриле, греть час при 50 градусах. После дериватизации надо избавляться от избытка реактивов с помощью ТФЭ или двумерной хроматографии, иначе подавление сигнала будет жутким. Другой реактив, который я пробовал, дает тоже хорошую чувствительность, но условия я не оптимизировал, просто оставлял на ночь в присутствии DMAP. Это 4-диметиламинобензоил хлорид. Можно, конечно, попробовать и 4-диметиламинофенилизоцианат, он тоже легко доступен, но я не пробовал. Есть работы с более экзотическими реагентами, например: D.W. Johnson,... J. Lipid Res., 42, 1699-1705 (2001) Они утверждают, что их дериватизация дает чувствительность на порядок выше, чем с помощью FMPT. Только реактив коммерчески недоступен... Еще один пример - получение диметилглициновых эфиров: D.W. Johnson, J. Mass Spectrom., 36(3), 277-283 (2001) Еще более экзотическая дериватизация дает очень сильный сигнал при отрицательной ионизации, но требует работы с комплексом пиридин-трехокись серы: R. Sandhoff,... J. Lipid Res., 40, 126-132 (1999) Успехов! |
||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
21.09.2009 // 20:33:26
Спасибо огромное, пойду по ссылкам и буду смотреть. Для архива добавлю что Sandhoff et al (последняя указанная вами ссылка) в наших руках работало плохо, огрмный бэкграунд и плохо воспроизводимые выходы. Интересно что простейший метод: Liebisch, G., Binder, M., Schifferer, R., Langmann, T., Schulz, B. and Schmitz, G. (2006) High throughput quantification of cholesterol and cholesteryl ester by electrospray ionization tandem mass spectrometry (ESI-MS/MS). Biochim Biophys Acta, 1761, 121-128. по крайней мере по холестерину работает гораздо лучше. Идея в том что гидроксил мягко (чтобы не порушить эфиры холестерина и жирных кислот) зашивается ацетилированием и холестерилацетат замечательно летит как аддукт с аммонием (а сам холестерин практически нет). В МС/МС аддукта заряд уходит на холестерольный остаток который замечательно детектируется. Чутье даже выше чем у метода с сульфированием, потому что шума практически нет. К сожалению, с другими стеролами из нескольких которые мы пробовали чутье было сильно ниже: в причинах разбираемся, но уже ясно что нужно думать об альтернативах |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Pavel Пользователь Ранг: 81 |
21.09.2009 // 20:35:48
LipidMAPS, core J |
||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
22.09.2009 // 8:10:13
Редактировано 2 раз(а) Интересно! Т.е. Lipid Maps crowd советует вообще НЕ делать дериватизацию, а просто палить по аммониевым кластерам? Кстати (так чтобы уж побрюзжать): ну что за манера давать протоколы которые не воспроизвести? Ежу понятно, что если они идут за кластерами, то orifice fragmentation / declustering и collision energy и решат какие будут результаты. И давать диапазон энергий (или вольт где то в орифисе) как-то не благородно, что ли. И потом, времена удерживания тоже можно было бы указать. Никто не просил бы точного совпадения, но elution order можно было бы посмотреть А так - вроде и работа сделана (и за NIH денюжку можно отчитаться), но каждому кто хочет методу воспроизвсти нужно по сути начать снова. Да и хоть бы одну оценку дали по чутью ... |
||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
22.09.2009 // 16:18:56
Редактировано 1 раз(а) Если верить утверждению, что чувствительность " between 10 and 2000 fmol on-column" (из последней ссылки), то по закону подлости для большинства стеролов она окажется ближе к верхнему пределу. И для ваших целей может не хватить. Кстати, мой опыт показывает, что чувствительность по аммиачным кластерам очень сильно зависит от конструкции источника. Самым лучшим в этом смысле был источник прибора API-III. Turbo-V современных приборов от Sciex тоже неплох для этого дела, но уже похуже. А вот HESI-II от Thermo, который на Vantage, давит их просто в зародыше... |
||
|
Pavel Пользователь Ранг: 81 |
22.09.2009 // 21:41:40
Просто кто-то в верхах этой организации объявил QTRAP4000 официальным прибором для липидомики. 
|
||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
23.09.2009 // 9:52:54
Да, я тоже слышал они массово закупали QTRAPs - прибор хороший, "базара нет" (с). Но тревожно то, что есть стремление сделать прибор и методы что называется, неофициально (но жестко) признаным стандартом - типа, "так правильные пацаны делают липидомикс", а кто делает не так - делает неправильно. Проблема в том что идеология таких анализов довольно старая - те же precursor ion and neutral loss scan, ну или MRM если с LC. Когда же пришли Орбитрэпы, многие проблемы просто исчезли благодаря 100,000 разрешению. Т.е. в области наблюдается интересная динамика, которую жалко потерять если QTRAP'ы станут "индустриальным стандартом" Все, заканчиваю - это уже флуд 100%. Но, пусть будет в архиве до кучи. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 26
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
