Форумы ANCHEM.RU: Вопросы по ВЭЖХ витаминов из растительного сырья

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Вопросы по ВЭЖХ витаминов из растительного сырья >>>

Ответов в этой теме: 7

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Вопросы по ВЭЖХ витаминов из растительного сырья

мом
Пользователь
Ранг: 296

19.01.2009 // 18:34:48

День добрый.
Вопросы по ВЭЖХ витаминов из растительного сырья
Я понимаю что «наш» форум уже как библия уже содержит все ответ, но я не нашел, отнеситесь терпимо и скажите ссылку на тему (дату, страницу).
При заколе водного экстракта из листьев, показалось небо в алмазах по количеству пиков (цитата коллеги), что делать. Я понимаю, что анализ водарастворимых витаминов в одном флаконе---задача не простая. Но с чего начать. По началу я обрадовался проколов стандарты Аск., Никат., Передок., Тиам., Риб., и наложив их на мою хроматогамму. Но позже прописав на разных длинах, вол я получил разное спектральное отношения, то есть это или неоднородные пики, либо вообще не те вещества и это просто со-элюирование. Так что сейчас я в тупике. Что попробовать дальше.
Другой вопрос. Поправите меня если я пне прав, аскорбинка любит низкий pH а фолька pH за 8, что делать если мне нужно приготовить модельную смесь содержащую эти два компонента. При низком pH я не могу растворить толком фольку(приходится растворять при рН 7,5 и выше) если выводить рН позже до 2,5-3 фолька выпадает, что не так.
Еще вопрос, в литературе нашел подвижная фаза 0,8% кислоты в воде на С-18, померил рН 1,42 , ограничение для прибора не ниже 2 что делать. Сделал на этой кислоте рН 2 и аск. вышла одним пиком в отличие от фазы 0,4М перхлорат где она выходит почти сразу(за мертвым объемом) да еще и «гребешком».можно ли опускается по рН ниже 2 и чем это чревато.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

мом
Пользователь
Ранг: 296

19.01.2009 // 20:42:46

Редактировано 2 раз(а)

Чёрт, увидел опечатку в заголовке,

извените.

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1375

20.01.2009 // 9:18:38

Редактировано 4 раз(а)

мом пишет:
День добрый.
Вопросы по ВЭЖХ витаминов из растительного сырья...

Достали с водорастворимыми витаминами...

Пишем условия оригинального метода разделения С(2,3;254нм), PP(4,1;254нм), B3(6,2;204нм), B6(11,7;292нм),B1(15,5;254нм), B2(16,4;267нм), Bc(16,8;281нм), B12, H (перечислены в порядке элюирования, время выхода, длина волны детектора):
колонка Luna 5u C18(2) 5мкм 150х2 Phenomenex;
температура колонки - комнатная, 20-25С;
Элюенты готовим разбавляя раствор 20мМ гексансульфоната Na в 0,025н H2SO4 ;
элюент А - 20мМ гексансульфоната Na в 0,025н H2SO4 + ацетонитрил 1:1 v/v;
элюент В - 10мМ гексансульфоната Na в в 0,025н H2SO4;
градиент: 0-0,5мин 5%А
0,5-25мин (5->68)%А
25--25,5мин (68->5)%А
кондиционирование - 20мин, 100%В;
поток - 0,4мл/мин;
объем петли - 5 мкл;
общая продолжительность цикла - 60мин.
Для стабилизации условий разделения необходим один полный холостой цикл.
Пробоподготовка: измельченное растительное сырье 2г +2г 40мМ (возможно меньше) раствора аммиака озвучивают при 30-40С в течение 15мин. Смесь центрифугируют 20мин 4000 об/мин, супернатант фильтруют 0,45мкм, собирая 0,5-1мл фильтрата и хроматографируют.
Удачи!

мом
Пользователь
Ранг: 296

20.01.2009 // 15:34:32

Редактировано 1 раз(а)

День добрый.
Большое человеческое спасибо.
Хотя не понятно по поводу со-элиирования
Буду работать, разбератся.

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1375

20.01.2009 // 16:45:02

мом пишет:
День добрый.
Большое человеческое спасибо.
Хотя не понятно по поводу со-элиирования
Буду работать, разбератся.

Никакого соэлюирования нет. Все витамины делятся до базовой.

мом
Пользователь
Ранг: 296

21.01.2009 // 2:47:21

День добрый.
Сделаю по вашей методе, она отличается, от той которой воспользовался я.

Ещё раз спасибо.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

АналитПро, ООО
Комплексное оснащение химико-аналитических и испытательных лабораторий. Консалтинг, информационное и научно-техническое сопровождение поставок лабораторного и аналитического оборудования. Комплектация лабораторий, подбор методик и оборудования.

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1375

21.01.2009 // 12:28:08

мом пишет:
День добрый.
Сделаю по вашей методе, она отличается, от той которой воспользовался я.
Ещё раз спасибо.

Хочу обратить внимание на необходимость предварительного одного холостого хроматографического цикла для стабилизации условий разделения и воспроизводимости времен удерживания.

мом
Пользователь
Ранг: 296

21.01.2009 // 19:00:39

Спасибо учту.


Ответов в этой теме: 7	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты