Форумы ANCHEM.RU: ВЭЖХ: раздвоение пиков на новой колонке

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ: раздвоение пиков на новой колонке >>>

  Ответов в этой теме: 24
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Волгин
VIP Member
Ранг: 1335

25.10.2018 // 20:16:09

Редактировано 4 раз(а)

Присоединяюсь к двум предыдущим ораторам!

Кто-то из них...

Начал писать, а потом задумался. То, о чем написали они может произойти в изократике, у Вас же градиент. В этом случае пики поджимаются, и чем дальше, тем сильнее. На дальних пиках размывание в начале вообще сказаться не должно.
Здесь скорее другое. У Вас состав элюента 50:50 выходит из смесителя хроматографа только на 34-й минуте. Из колонки - еще позже. А вводите образец в колонку Вы в этом составе, когда в нее втекает элюент с начальным составом (90:10). У Вас получается локальная зона с большей элюирующей способностью, тем более при вводимом объеме 20 мкл. И эта зона "тащит" за собой аналиты, что приводит к их размыванию, двоению, называйте это как хотите.
Выхода 2. Оба классических. 1. Растворите пробу в начальном составе элюента - это лучший выход. 2. Похуже. Уменьшите вводимый объем до 5 мкл, это уменьшит влияние элюирующей силы растворителя.
И еще один общий совет. Присоединяюсь к ув. Avet'у. Всегда, распаковав новую колонку, проводите ее тестирование в указанных в сопроводительных материалах условиях. Тогда можно будет предъявить производителю колонки претензию. Или понять, что у Вас что-то неладно с прибором. Это я как производитель колонок пишу. И в дальнейшем, если "что-то не так будет в королевстве датском", можно будет, опять повторив этот тест, попытаться понять: что-то с колонкой, с прибором, с элюентом, с руками, наконец.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Avet
Пользователь
Ранг: 1086

25.10.2018 // 20:16:53

Simbirtseva Olga пишет:

SergeyK пишет:
Хроматограммы на файлообменник положите. Прибор какой, каталожник колонки какой? Проба как готовится, кто аналиты, кто примеси, кто матрица? Детектор, длина волны. Фазы фильтровали, пробу?
https://hplctips.blogspot.com/2016/09/hplc-peak-splitting-common-reasons-for.html?m=1
Прибор Waters Alliance с детектором 2998, колонка SymmetryShield RP8 (кат. WAT200670).

Проба - бензокаин, 4-аминобензойная кислота и 4-нитробензойная кислота с концентрацией каждого из компонентов 1 мкг/мл. К навескам добавляют растворитель (ПФ А: ПФ В=50:50), воздействуют ультразвуком и доводят растворителем до финального объема.

Фазы фильтровала и дегазировала ультразвуком.

Пробу фильтровала через фильтр PTFE с диаметром пор 0,45 мкм.

Длина волны - 280 нм.

Вопрос о самих пробах аналитов: они какой степени чистоты? Это стандарты? Какие? Второй вопрос: в USP приводится объем инжекции?

Avet
Пользователь
Ранг: 1086

25.10.2018 // 20:16:54

Редактировано 2 раз(а)

Пользователь удалил свое сообщение

Simbirtseva Olga
Пользователь
Ранг: 5

29.10.2018 // 13:54:09

Редактировано 1 раз(а)

Благодарю всех за неравнодушное отношение и советы!

Проблема установлена: все-таки брак колонки.

Bob12111956
Пользователь
Ранг: 4

30.10.2018 // 8:14:36

У Вас проба в 50%-ном ацетонитриле, а элюировать начинаете с 10%-ного. Часть образца может просто выпадать из раствора, вот пики и двоятся. Ещё и не то может быть. Попробуйте:
а) готовить пробу в растворе с меньшим содержанием ацетонитрила
б) или уменьшить концентрации

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Лаборатория стереохимии сорбционных процессов (ЛССП) ИНЭОС РАН
Анализы различных классов соединений (органический синтез, биотехнология, загрязнения почвы, воды, анализ энантиомерного состава) методами ВЭЖХ и ГХ.

Bob12111956
Пользователь
Ранг: 4

30.10.2018 // 8:16:25

Bob12111956 пишет:
У Вас проба в 50%-ном ацетонитриле, а элюировать начинаете с 10%-ного. Часть образца может просто выпадать из раствора, вот пики и двоятся. Ещё и не то может быть. Попробуйте:
а) готовить пробу в растворе с меньшим содержанием ацетонитрила
б) или уменьшить концентрации

Простите, вторую страницу не дочитал...

ArtPharm
Пользователь
Ранг: 109

08.11.2018 // 14:44:52

Не может быть. Брак колонки?? И как все завершилось...?

Avet
Пользователь
Ранг: 1086

08.11.2018 // 14:55:58