15.10.2003 // 6:16:04

---

Анатолий пишет:
Коллеги!
Срочно требуются методики (ссылки) подготовки проб для анализа аминокислот в кормах или растениях посредством ВЭЖХ. Спасибо.

---

22.10.2003 // 18:07:47

---

Леонид пишет:
Костя! Карнитин или, как его еще называют, витамин Вк, никакая не аминокислота, а оксибетаин. Это две очень большие разницы.
Кстати, делать его на обращенке с SDS - категорически противопоказано (разве что на студенческом практикуме), по причине отвратной формы пика и эффективности разделения. Аминь!

---

30.11.2003 // 21:22:11

---

Роман пишет:

---

Анатолий пишет:
Коллеги!
Срочно требуются методики (ссылки) подготовки проб для анализа аминокислот в кормах или растениях посредством ВЭЖХ. Спасибо.

---

Определение аминокислотного состава белков основывается на классическом гидролизе по методу Мура и Штейна с последующим хроматографированием полученного гидролизата, предварительно прошедшего стадию дериватизации. Гидролиз проводят в запаянных ампулах или специальных дигесторных пробирках. К навеске протеина добавляют соляную кислоту в концентрации 6 моль/л из расчета 1 мл на 10 мг белка и выдерживают 24 часа при температуре 1100С. В некоторых случаях время гидролиза увеличивают до 48-72 часов для полного разрыва связей, образованных аминокислотами валин и изолейцин. При проведении такого типа гидролиза частично разрушаются цистин, тирозин, метионин, треонин (примерно на 5%) и серин (примерно на 10%), триптофан разрушается полностью, а аспаргин и глутамин переходят в аспаргиновую и глутаминовую кислоту. Для предотвращения разрушения цистина и метионина проводят окисление до цистеиновой кислоты и метионинсульфона с помощью смеси надмуравьиной кислоты и пероксида водорода (при этом разрушаются тирозин и гистидин). Тирозин, треонин, серин и метионин защищают при помощи таких антиоксидантов как тиогликолевая кислота или фенол (в концентрации 0,01-0,02%). При определении триптофана применяют щелочной гидролиз (при этом разрушаются такие аминокислоты как аргинин, треонин, серин и цистин). В качестве основания чаще применяют гидроксид бария, так как ионы бария могут быть легко осаждены из раствора после гидролиза, в отличии, например от ионов натрия или лития, чьи гидроокиси часто используют для щелочного гидролиза. Осаждение необходимо по той причине, что многие соли, особенно в большой концентрации, если они не удалены из раствора, могут оказывать негативный эффект на последующую стадию анализа. Их присутствие снижает скорость превращения аминокислот в флуоресцирующие производные на стадии дериватизации.
Поскольку растворы аминокислот, в основном, слабо поглощают УФ и видимый свет и не обладают собственной флуоресценцией, проводят их химическое превращение (дериватизацию) с целью получения сильно флуоресцирующих производных. Наиболее распространенным методом дериватизации является реакция аминокислот с орто-фталевым альдегидом (ОФА) в присутствии нуклеофильного агента - 2-меркаптоэтанола (2МЕ), в результате которой образуются сильно флуоресцирующие продукты - замещенные изоиндолы. Особенностью использования ОФА является то, что он реагирует только с первичными аминокилотами (по этой причине не возможно определение пролина), а также медленно реагирует с цистином, но хорошо реагирует с цистеиновой кислотой, поэтому необходимо предварительное окисление.
Количественный расчет проводят по методу внутреннего стандарта, в качестве которого применяют аминокислоты не встречающиеся в природе (например норвалин или норлейцин).

С уважением,
Роман

P.S. Если нужны подробности, можно обсудить их в моем персональном форуме или по e-mail.

---

16.12.2003 // 15:32:40

---

Елена пишет:
Коллеги!
Нам необходимо срочно провести анализ свободных и белковых аминокислот в растительных образцах. Вытяжки подготовлены для анализа аминокислот на аминокислотном анализаторе. Нет ли возможности где-либо провести анализ за оплату? Спасибо за любую информацию.

---

  Ответов в этой теме: 39
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

Ответ на тему