| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Как избавиться от скочка базовой линии? >>>
|
 |
| Автор | Тема: Как избавиться от скочка базовой линии? | |||||
|
Ovsienko Пользователь Ранг: 45 |
 22.07.2005 // 17:22:59
По методике, которую необходимо воспроизвести, прописан градиент (по ацетонитрилу: 0мин-0%,5мин-0%, 10мин-60%, 15мин-0%, 20мин-0%) на Лихросфере РП-8, данный метод вызывает такой всплеск колебаний нулевой линии что индефикация примесей вызывает некоторые сомнения, и как тут быть? Помогите добиться успеха, пожалуста. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Andrew VIP Member Ранг: 1370 |
 22.07.2005 // 19:55:48
Хорошая регенерация колонки и идеально чистые компоненты элюента - залог Вашего успеха. Если под всплесками Вы понимаете нечто похожее на пики примесей, то это скорее всего они и есть. Главный источник - вода и компоненты буфера. У вас очень долго (по-моему, неоправдано) гонится слабый элюент. При этом примеси концентрируются и ваходят из колонке при повышениии содержания ацетонитрила. Какой у Вас прибор и колонка? Если диаметр 2 мм, то объем при 0% ацетонитрила явно можно уменьшить. |
|||||
|
bf109xxl Пользователь Ранг: 1727 |
22.07.2005 // 20:37:02
Какой характер колебаний? А то, в принципе, сложную нулевую линию можно эффективно отфильтровать вейвлетами, используя сильно гладкую аппроксимацию высокого порядка. |
|||||
|
Сергей Костиков VIP Member Ранг: 1811 |
22.07.2005 // 21:45:45
Редактировано 2 раз(а) Не очень понятно, что за прибор? Такие градиенты задаются реально на двухнасоснике. Правда, в данном случае непонятно, зачем. Что за аналит? Да и в лучшем случае замена органики на воду ( и наоборот), как минимум, требует тщательной очистки и дегазации обоих компонентов. Кстати, строго говоря, вода в данной системе (если правильно понял, обращенка С8)- не слабый, а по идее, сильный элюент. Что не увеличивает её растворяющей способности по отношению к некоторым участникам из сорбата. Тут уж к разработчикам методики и к теоретикам. Кстати, настораживают такие "скачки" градиента (тудым-сюдым). Неважно отточено. Чистая вода как элюент в ВЭЖХ - редкость. А нулевка - она привыкла колебаться, тут главное, чтобы без лишних пиков, т.е. так, "выше-ниже", "сигнал/шум", аппроксимация. Чтобы без фанатизма (это когда в разы, а то и на порядки по УФ). Потому что в противном случае - точно, грязь. Или воздух. И такие колебания состава подвижной фазы здесь только в помощь "сорным" пикам. Попробуйте убедиться в их повторяемости от вкола до вкола - что-то, думаю, будет видно. |
|||||
|
Andrew VIP Member Ранг: 1370 |
24.07.2005 // 0:13:49
А по мне так в принципе идея разработчика ясна. После выходы всех целевых компонентов содержание ацетонитрила относительно плавно снижается до нуля. Может в это время еще какой-то компонент выползает, хотя и вряд ли (трудно судить, если задача неизвестна). Это делается, чтобы колонка пришла в равновесие с водой (буфером). А потом градиент начинают с 0, потому, что надо определять в одном анализе аналиты с сильно различающейся гидрофобностью. Так? |
|||||
|
Ovsienko Пользователь Ранг: 45 |
25.07.2005 // 9:42:27
Прибор: Varian, двухнасосный прибор, проверяем лекарственное средство (2-оксо-1-пирролидинилацетамид); подвижная фаза: 1) буфер 3.5г K2HPO4 дигидрат (рН=7,0) и 2) ацетонитрил; Колонка RP 8 Lichrospher 5мкм. Градиент по ацетонитрилу: до 4мин -0%, 10мин - 60%, 16мин - 0% , 20мин - 0%. У меня при воспроизведении данной методики начиная с 7мин идет сильный всплеск фонового сигнала, такой горбыль идет с последующим плавным ростом и падением в ноль. Ну и утыкан сей горбыль кучей маленьких пичков. Закол просто буфера дал почти одинаковую картинку. Как сгладить сие чудо, мне необходимо увидеть примеси которые действительно есть в иньекции? Благодарю за все советы. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
25.07.2005 // 10:03:32
Кто Вам посоветовал делать такой градиент? На обращенной фазе лучше на чистой воде не работать. Далеко не все колонки способны это безболезнено перенести. Начинать нужно хотя бы с 5-6% ацетонитрила. И я не понял. С 6-й минуты Вы сразу даете 60% ацетонитрила?  Так в этом случае Вы никогда не избавитесь от артефактных пиков. Сколь бы чистая вода у Вас ни была, примеси из воды вначале градиента накапливаются в колонке, а как только идет увеличение концентрации ацетонитрила эти примеси весело смываются. Как в ТФЭ. Выхода из положения два: 1. Используйте менее крутой и более плавный градиент, начиная его не с воды, а, например, с 4%раствора ацетонитрила. 2. Почистите свою воду, которая используется для приготовления элюента. Это можно сделать пропустив ее через патрончики для ТФЭ с ОФ, например Диапак С16. На худой конец, пропустите несколько сот милилитров буфера через рабочую колонку и на этом буфере уже и делаете элюент. Колонку, ясное дело, после этого нужно промыть 80% ацетонитрилом, а потом полученным после колонки буфером. |
|||||
|
Ovsienko Пользователь Ранг: 45 |
25.07.2005 // 10:47:37
Методика немецкая, она у меня в татье вбита, и я могу ее только фрагментами изменять, ацетонитрил плавно поднимается с 0 до 60% за 5минут и обратно в ноль. Цель понятна, там один пик выходит уж слишком поздно, вот его и ускоряют. |
|||||
|
snsychev VIP Member Ранг: 282 |
25.07.2005 // 11:34:57
Извините, хоть методика и немецкая, но при таком градиенте Вам ничего не поможет. Так что поменяйте методику. Сыч. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 8 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]